恩若沙星和环丙沙星试验法

嗯诺沙星和环丙沙星试验法

1、定量法原理

给试样添加流动相和氰化二氯甲烷混合溶液，均质化后，经热处理，加乙烷提取测定。

2、测定仪器

液体色谱仪/荧光定仪

3、试药和试液

（1）标准原液：精确取出嗯诺沙星和环丙沙星标准品放置于100ml容量的烧瓶，使其溶解于少量的0.1N NaOH中，然后用甲醇填充至标志线为止，使其达到100μg/ml浓度使用。

（2）标准溶液：取10ml标准原液，在流动相中稀释至100μg/ml使用。

（3）其他试剂：特级

4、试验溶剂的调制

将试样研磨，取5g加入流动相和氰化二氯甲烷安1：1比例的混合液40ml，用均质机均质2分钟。将此液在80℃中热处理10分钟，冷却后用5,000rpm离心机分离10分钟，取上清液。将此上清液移入分液滤斗，加入50ml甲醇，静置至液层分离时为止。将被分离的下层液在40℃中减压浓缩至只剩下残渣时为止。将此干固物经2.5ml的流动相充分溶解后，用0.45的过滤网过滤，作为试验溶液使用。

5、试验操作

（1）测定条件

*色谱柱：C18(4.6㎜×250㎜,5μm)或与此相同者。

*流动相：0.4%三羟基三乙胺、0.4%的磷酸混合液和甲醛（79：21）。

*流  速：1.0ml/分。

*测定波长：激发波长278nm，测定波长455nm。

（2）定量试验

将试验溶液和标准溶液根据上述条件注入液体色谱仪，将获得的各个的停留时间进行比较，用的高度和面积制作检量线，求出试样中嗯诺沙星和环丙沙星含量。